モノクローナル抗体作製では、ハイブリドーマ取得までに5～6ヶ月程度を要します。また、ご希望条件に合致したハイブリドーマが得られない場合もあります。こうしたリスクをできる限り軽減するため、弊社ではモノクローナル抗体作製を3つのセクションに分けて進めております。
- 血清評価用の正常血清、融合時血清を同封いたします。
| 抗原のご提供について | モノクローナル抗体作製において、免疫、アッセイに必要な量の抗原をご提供いただきます。通常、抗原1種類につき、マウス5匹、またはラット3匹に免疫を行います。抗原の形状につきましては、粉末、液体、PAGE Gel等、どの様な形状でも可能ですが、アッセイ用抗原は出来るだけ水溶性の抗原をお願いしております。お客様からのご依頼を確認した後、モノクローナル抗体作製の計画書をお送りいたします。
■必要抗原量
・マウス：約0.3mg／匹
・ラット：約0.5mg／匹 |
|---|
Section 1
（ 約2ヶ月半 ）
| 免疫開始 | 免疫予定の動物は、入荷後約1週間の予備飼育を行った後、正常血清（血清約50uL）を採血します。その後、フロイント・アジュバントと等量混合した抗原を、皮内、数ヶ所～十数ヶ所に免疫いたします。この操作を、約2週間間隔で計4回行います。 |
|---|
| 試採血・ELISA | 計4回の免疫後、7日目に試採血（血液約50uL）を行います。その後、ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) により力価を測定し、データおよび、免疫後血清、正常血清をお客様へお送りいたします。 |
|---|
| 追加免疫 or 細胞融合 | ELISAの結果を参考に、お客様とご相談の上、追加免疫（最長4回まで）または細胞融合の予定を決定いたします。
※この時点で必要な力価が得られなかった場合は、ここでモノクローナル抗体作製を中止することも可能です。 |
|---|
Section 2
（ 約1ヶ月 ）
| 最終免疫 | 細胞融合実施の3日前に最終免疫を行います。この時、抗原の性状により尾静脈または腹腔内に投与いたします。 |
|---|
| 細胞融合 | 融合後、脾細胞の数に応じて、マウスの場合は1匹につき96well-plate 4枚程度、ラットの場合は6枚程度に播種します。融合時に、全採血も行い、ハイブリドーマと一緒にお客様へお送りいたしますが、血清量につきましては保証いたしかねます。ご了承ください。 |
|---|
| スクリーニング | 融合後、約10日間で初回アッセイが可能となります。ELISAにより培養上清をアッセイし、所定の発色が認められたウェル中の細胞を48well-plateに移します。移植後の培養上清についてELISAにより特異性等を再確認後、測定データおよび陽性ウェル培養上清10種（約500uL）をお客様へお送りいたします。 |
|---|
| ウェルの選択 | お客様に、クローニングへ移行するウェル（5個以内）をご選択していただきます。この間、培養は継続しておりますので、培養上清をお送りしてから1週間以内でのご選択をお願いしております。
※この時点で、ご希望の陽性ウェルが得られなかった場合、ここでモノクローナル抗体作製を中止することも可能です。 |
|---|
Section 3
（ 約1ヶ月半 ）
| 一次クローニング | 選択していただいたウェルについて、限界希釈法によるクローニングを実施いたします（96-wellplate 各1枚）。クローニングから約2週間でELISAによるアッセイを行い、一枚のプレートにつき2個のウェルを選択し、一方については二次クローニングを実施、他方は少量の培地で培養した後、凍結保存いたします。この時のウェルの選択につきましては、お客様による選択または当社選択のどちらでも可能です。 |
|---|
| 二次クローニング | ご選択されたウェルにつきまして、限界希釈法による2度目のクローニングを実施いたします（96-well plate 各1枚）。 |
|---|
| ハイブリドーマ確立 | 二次クローニングから約2週間でELISAによるアッセイを行い、一枚のプレートにつき2個のウェルを選択し、拡大培養を行い、ハイブリドーマを確立します。その後、約40mLの培養上清、ハイブリドーマ凍結細胞（2チューブ）、モノクローナル抗体のサブクラスチェックの結果を納品いたします。 |
|---|
■ 価格
[マウス（BALB/c）のケース]
| セクション | 価格（消費税別） | 納期 |
|---|
| Section 1 | 27,000円／匹 | 約2ヶ月 |
|---|
| Section 2 | 600,000円 | 約1ヶ月 |
|---|
| Section 3 | 600,000円 | 約1ヶ月半 |
|---|
トータル価格：1,335,000円
※マウス5匹使用
■ 価格
[ラット（SD,Wister）のケース]
| セクション | 価格（消費税別） | 納期 |
|---|
| Section 1 | 45,000円／匹 | 約2ヶ月 |
|---|
| Section 2 | 600,000円 | 約1ヶ月 |
|---|
| Section 3 | 600,000円 | 約1ヶ月半 |
|---|
トータル価格：1,335,000円
※ラット3匹使用
- 上記の価格は、モノクローナル抗体作製の基本価格となります。それ以外のお客様ご指定プロトコールにつきましては、ご相談ください。
- 作製したハイブリドーマによるモノクローナル抗体のサブクラスの決定を無料で行います。
- モノクローナル抗体の腹水作製等をあわせてご依頼いただいた場合は、割引価格にて対応いたします。
- 納期に関しましては、細胞の状態により上記よりも長くなる場合もありますので、ご了承ください。
- ご請求は各セクションごとにおこないます。ただし、Section 2,3においてお客様のご希望に添うようなクローンが得られず、モノクローナル抗体作製を中止とした場合、以下の様なご請求内容になります。
［ 請求例1 ］
Section 2の初回ELISAで、ご希望の陽性クローンが得られなかった場合
をご請求させていただきます。
［ 請求例2 ］
Section 3のクローニング時に、ご希望の陽性クローンが全て消失した場合
- Section 1 + Section 2 + Section 3：半額
をご請求させていただきます。
■ オプション
| 項目 | 価格（消費税別） | 納期 |
|---|
| クローニング ＋ アッセイ | 50,000円／1細胞 | 約3週間 |
|---|
| 培養上清作製 | 10,000円／50ml | 約2週間 |
|---|
